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產(chǎn)品組成及保存條件：

產(chǎn)品介紹：

本試劑盒提供了一種簡單、方便的從培養(yǎng)細胞或新鮮組織中抽提核蛋白的方法，整個過程只需約60 分鐘就可以將核蛋白和漿蛋白從細胞中分離出來，得到的蛋白可以用于 Western blot等實驗。本試劑盒通過漿蛋白抽提試劑使細胞膨脹破裂，釋放出胞漿蛋白，再通過離心得到細胞核，然后通過核蛋白抽提試劑抽提得到細胞核蛋白，可以抽提50/100個樣品（每個樣品約2×10⁶個Hela細胞或40mg組織）。

本品僅用于科研。

提取步驟：

一、對于體外培養(yǎng)細胞：

1．根據(jù)用量取適當?shù)臐{蛋白抽提試劑和核蛋白抽提試劑加入 PMSF，使 PMSF 的最終濃度為 1mM；PMSF 需現(xiàn)用現(xiàn)加，若目標蛋白含有豐富的半胱氨酸，可以在兩種蛋白抽提液中加入 DTT 至終濃度 0.5mM。

2．對于貼壁細胞，去除培養(yǎng)液，用 PBS 洗一遍，用細胞刮刀收集細胞，或用 EDTA 消化后吹打下細胞（最好不用胰酶消化，以免胰酶消化目的蛋白）。500 g離心2～3分鐘收集細胞，吸盡上清留下沉淀備用。

3．對于懸浮細胞：用 PBS 洗一遍，500 g離心2～3分鐘收集細胞，吸盡上清，留下細胞沉淀備用。

4．每 20μL 細胞沉淀加入 200μL 漿蛋白抽提試劑（2×10⁶個細胞沉淀的體積約20μL或40mg）。

5．用移液器吹打或高速渦旋 15 秒（可適當延長），必須使細胞沉淀完全分散開成單細胞懸液。細胞沉淀分散不完全會導致蛋白產(chǎn)量降低。

6．冰浴 10 分鐘。

7．最高轉(zhuǎn)速劇烈渦旋10秒，4℃ 12000～16000g 離心10分鐘。

8．上清即為抽提得到的細胞漿蛋白，立即吸取上清至預冷的樣品管中備用，進行后續(xù)的 PAGE、Western 等實驗，但蛋白濃度較低，可根據(jù)需要進行相應濃縮。

9．沉淀即為細胞核，要完全吸盡殘余的上清（避免細胞漿蛋白的污染），加入50-100μL核蛋白抽提試劑。

10．用移液器吹打或高速渦旋15秒（可適當延長）至沉淀完全分散，冰浴10分鐘。

11．最高轉(zhuǎn)速劇烈渦旋10秒，4℃ 12000～16000g 離心10分鐘。

12．立即吸取上清至預冷的樣品管中，此即為抽提得到的細胞核蛋白?？蛇M行后續(xù)實驗或-70℃凍存。

二、對于組織樣品：

把組織稱重后，盡可能切成非常細小的碎片，按每 50mg 組織加入 200μL-500μL PBS，用勻漿器冰上勻漿制成細胞懸液，500 g 離心 2～3 分鐘收集細胞，吸盡上清，收集沉淀；再加入 200μL 漿蛋白抽提試劑后接上述步驟 5。

注意事項：

1.     1. 裂解得到的蛋白樣品，由于含有較高濃度的去垢劑干擾，不能用 Bradford 法測定蛋白濃度，可以選用本公司生產(chǎn)的 BCA 蛋白定量試劑盒(貨號C05-02002)測定蛋白濃度。

2.    2.  對于組織樣品，本試劑盒適用于新鮮組織，對凍存組織抽提效果較差。

3.    3.  為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。