| 產(chǎn)品編號 | CS112 |
| 英文名稱 | Neutrophils Separation Medium Kit (Rat) |
| 中文名稱 | 大鼠外周血中性粒細胞分離試劑盒 |
| 別 名 | Rat peripheral blood Neutrophils Separation Medium Kit; |
| 克 隆 號 | |
| CAS | |
| 理論分子量 | kDa |
| 檢測分子量 | |
| 保存條件 | 室溫避光保存，2年有效. |
| 注意事項 | This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications. |
| 產(chǎn)品介紹 |
試劑盒組成： 試劑A：????200mL 試劑C：????100mL 細胞洗滌液：????200mL 紅細胞裂解液：????100mL 產(chǎn)品簡介： 本產(chǎn)品是一種用于分離各種動物外周血中性粒細胞的無菌、低內(nèi)毒素水平的密度梯度分離液。無菌條件下所分離的細胞可用于免疫學檢測。其分離原理是根據(jù)細胞的密度差異將葡聚糖（右旋糖酐）和泛影酸鈉按一定比例混合，調(diào)整比重、pH 值和滲透壓，經(jīng)過澄清及過濾除菌后制成一種密度梯度分離液，經(jīng)過密度梯度離心使一定密度的細胞按相應(yīng)密度梯度分布，從而將各種細胞加以分離。通過離心使一定密度的細胞按相應(yīng)密度梯度分布，從而將中性粒細胞從外周血分離出來。 產(chǎn)品參數(shù)： 密度：1.113±0.001g/mL 滲透壓：290~350 mOsm/kg H2O 無菌：0.1μm 濾膜過濾 中性粒細胞分離方法： 1. 取新鮮抗凝全血，血液體積小于5mL時，在離心管中先加入4mL試劑A，后將2mL試劑C小心疊加于試劑A之上，形成梯度界面（血液體積大于等于5mL，試劑A與試劑C比例2：1，試劑總量與稀釋后的樣本量相等。但二者的總體積不能超過離心管的三分之二，否則會影響分離效果），將血液平鋪到分離液液面上方，注意保持兩液面界面清晰。（可以使用巴氏德吸管吸取血液，然后將血液小心的平鋪于分離液上，因為兩者的密度差異，將形成明顯的分層界面。如果樣品較多，加樣的時間較長，在離心之前出現(xiàn)紅細胞成團下沉屬正?，F(xiàn)象。） 2. 室溫，水平轉(zhuǎn)子500~1000g，離心20~30min（血液的體積越大所需的離心力越大，離心時間越長，最佳的分離條件需摸索，離心轉(zhuǎn)速最大不超過1200g）。 3. 離心后，離心管中將出現(xiàn)兩層環(huán)狀乳白色細胞層，上層細胞為單個核細胞層，下層細胞為中性粒細胞層，如圖所示（個體差異或者是分離條件不同，粒細胞層可分離不明顯）。 4. 用吸管小心吸取試劑C與試劑A之間以及試劑A中的中性粒細胞到15mL潔凈的離心管中，10mL PBS或細胞洗滌液洗滌細胞。250g，離心10min（如有紅細胞混雜則加入適量紅細胞裂解液）。 5. 棄上清，5mL的PBS或細胞清洗液重懸細胞，250g，離心10min。 6. 重復步驟6 7. 棄上清，細胞重懸備用。 注意事項： 1. 開封前顛倒混勻，本分離液為無菌產(chǎn)品，為延長分離液保存時間，請在無菌條件下啟封，避免污染。 2. 待分離的抗凝全血要求新鮮，避免冷凍和冷藏。 3. 本實驗要求，在正常大氣壓下，分離液、分離樣本以及分離環(huán)境溫度為（18℃~25℃）。分離液在低溫時呈較高密度，在高溫時呈較低密度。細胞分離液從冰箱取出后，不可立即使用，操作前可將樣本和分離液置于20℃水浴中復溫20分鐘以保證分離溫度。4℃或者是溫度較低的條件下離心，可能會導致白膜層中紅細胞污染加重。 4. 稀釋血液或洗滌細胞，不可使用含Ca、Mg離子的緩沖液及培養(yǎng)液，其成分會導致血細胞凝集，大大降低細胞得率及純度。 5. 由于各品牌離心機的性能不同，實驗室環(huán)境溫度差異，可能影響分離效果，用戶可以調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù)和離心時間，摸索最佳的分離條件（具體分離條件各實驗室自定）。 6. 部分塑料制品（如聚苯乙烯）因其帶有的靜電作用，可能會導致細胞掛壁，影響分離效果。最好使用無靜電反應(yīng)的離心管，推薦使用未經(jīng)過堿處理的玻璃離心管。 7. 細胞重懸樣本的粘稠度或者是溫度差異，可能會影響分離效果，可以調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù)和離心時間，請摸索最佳的分離條件。 8. 如果要進一步對分離的細胞進行培養(yǎng)，在收集血液和分離過程中，注意無菌操作，避免污染。 9. 不同動物的組織細胞重懸在不同比重分離液中的細胞離散系數(shù)及細胞帶電不同，用戶在制定分離液時應(yīng)提供所需分離液的比重、動物種屬及被分離細胞的名稱。 |
| 1、抗體溶解方法 | |
| 2、抗體修復方式 | |
| 3、常用試劑的配制 | |
| 4、免疫組化操作步驟 | |
| 5、免疫組化問題解答 | |
| 6、Western Blotting 操作步驟 | |
| 7、Western Blotting 問題解答 | |
| 8、關(guān)于肽鏈的設(shè)計 | |
| 9、多肽的溶解與保存 | |
| 10、酶標抗體效價測定程序 | |
