| 產(chǎn)品編號(hào) | CS125 |
| 英文名稱(chēng) | Neutrophils Separation Medium Kit (Mouse bone marrow) |
| 中文名稱(chēng) | 小鼠骨髓中性粒細(xì)胞分離液試劑盒 |
| 克 隆 號(hào) | |
| CAS | |
| 理論分子量 | kDa |
| 檢測(cè)分子量 | |
| 保存條件 | 室溫避光保存，2年有效. |
| 注意事項(xiàng) | This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications. |
| 產(chǎn)品介紹 |
試劑盒組成： 骨髓中性粒細(xì)胞分離液：????200mL 紅細(xì)胞裂解液：????100mL 全血及組織稀釋液：????200mL 細(xì)胞洗滌液：????200mL 產(chǎn)品簡(jiǎn)介： 本產(chǎn)品是一種用于分離各種動(dòng)物骨髓中性粒細(xì)胞的無(wú)菌、低內(nèi)毒素水平的密度梯度分離液。無(wú)菌條件下所分離的細(xì)胞可用于免疫學(xué)檢測(cè)。其分離原理是根據(jù)細(xì)胞的密度差異將葡聚糖（右旋糖酐）和泛影酸鈉按一定比例混合，調(diào)整比重、pH 值和滲透壓，經(jīng)過(guò)澄清及過(guò)濾除菌后制成一種密度梯度分離液，經(jīng)過(guò)密度梯度離心使一定密度的細(xì)胞按相應(yīng)密度梯度分布，從而將各種細(xì)胞加以分離。通過(guò)離心使一定密度的細(xì)胞按相應(yīng)密度梯度分布，從而將中性粒細(xì)胞從骨髓中分離出來(lái)。 產(chǎn)品參數(shù)： 密度：1.113±0.001g/mL 滲透壓：290~350 mOsm/kg H2O 無(wú)菌：0.1μm 濾膜過(guò)濾 骨髓單細(xì)胞懸液制備方法（僅供參考）： 小動(dòng)物骨髓的采集： 1. 處死動(dòng)物，無(wú)菌提取股骨和脛骨，剪去兩端軟骨，露出紅色的骨髓腔（注意盡可能少的剪走骨髓腔）。 2. 取1ml的無(wú)菌注射器，吸取少量的含有10%標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清的稀釋液或者是含有血清的培養(yǎng)基，沖洗骨髓腔以獲得骨髓。 3. 最終制備成2×108–1×109/ml 的單細(xì)胞懸液備用。 大動(dòng)物骨髓的采集： 大動(dòng)物骨髓的采集可采取活體穿刺方法：先將動(dòng)物麻醉、固定、局部除毛、消毒皮膚，然后估計(jì)好皮膚到骨髓的距離，把骨髓穿刺針的長(zhǎng)度固定好。操作人員用左手把穿刺點(diǎn)周?chē)钠つw繃緊，右手將穿刺針在穿刺點(diǎn)垂直刺入，輕輕左右旋轉(zhuǎn)將穿刺針鉆入，當(dāng)穿刺針進(jìn)入骨髓腔時(shí)常有落空感。連接注射器緩慢抽吸骨髓組織，當(dāng)注射器內(nèi)抽到少許骨髓時(shí)即停止抽吸。用含10%標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清的稀釋液調(diào)整細(xì)胞濃度為2×108–1×109/ml 的單細(xì)胞懸液備用。 常用的骨髓穿刺點(diǎn)： 股骨：穿刺部位在股骨內(nèi)側(cè)面,靠下端的凹面處； 胸骨：穿刺部位是胸骨體與胸骨柄連接處； 肋骨：穿刺部位是第5～7肋骨各點(diǎn)的中點(diǎn)； 脛骨：穿刺部位是股骨內(nèi)側(cè)、靠下端的凹面處。如果穿刺采用的是肋骨，穿刺結(jié)束后要用膠布封貼穿刺孔，防止發(fā)生氣胸。 中性粒細(xì)胞分離方法： 1. 制備骨髓單細(xì)胞懸液。 2. 取一支適當(dāng)?shù)碾x心管，加入與組織單細(xì)胞懸液等量的分離液（分離液最少不得少于3 mL，總體積不能超過(guò)離心管的三分之二，否則會(huì)影響分離效果）。 3. 小心吸取單細(xì)胞懸液加于分離液液面上，注意保持兩液面界面清晰。（可以使用巴氏德吸管吸取單細(xì)胞懸液，然后小心的平鋪于分離液上，因?yàn)閮烧叩拿芏炔町?，將形成明顯的分層界面。如果樣品較多，加樣的時(shí)間較長(zhǎng)，在離心之前出現(xiàn)紅細(xì)胞成團(tuán)下沉屬正常 現(xiàn)象。） 4. 室溫，水平轉(zhuǎn)子500~900 g，離心20~30 min。（根據(jù)臟器組織單細(xì)胞懸液的量確定離心條件，單細(xì)胞懸液量越大，離心力越大，離心時(shí)間越長(zhǎng)，具體離心條件可以自行摸索，以達(dá)到最佳分離效果，離心轉(zhuǎn)速最大不超 過(guò)1200g）。 5. 離心后將出現(xiàn)明顯的分層：最上層是稀釋液；稀釋液與分離液之間是淋巴細(xì)胞層；分離液中為粒細(xì)胞層（個(gè)體差異或者是分離條件不同，粒細(xì)胞層可能分離不明顯）；最下層為紅細(xì)胞層。 6. 小心的吸取分離液層到15mL潔凈的離心管中，10mL PBS或細(xì)胞洗滌液洗滌白膜層細(xì)胞。250g，離心10min（如有紅細(xì)胞混雜則加入適量紅細(xì)胞裂解液） 7. 棄上清，5 mL的PBS或細(xì)胞清洗液重懸細(xì)胞，250 g，離心10 min。 8. 重復(fù)步驟7 9. 棄上清，細(xì)胞重懸備用。 注意事項(xiàng)： 1. 開(kāi)封前顛倒混勻，本分離液為無(wú)菌產(chǎn)品，為延長(zhǎng)分離液保存時(shí)間，請(qǐng)?jiān)跓o(wú)菌條件下啟封，避免污染。 2. 待分離的組織樣本要求新鮮，避免冷凍和冷藏。 3. 本實(shí)驗(yàn)要求，在正常大氣壓下，分離液、分離樣本以及分離環(huán)境溫度為（18℃~25℃）。分離液在低溫時(shí)呈較高密度，在高溫時(shí)呈較低密度。細(xì)胞分離液從冰箱取出后，不可立即使用，操作前可將樣本和分離液置于20℃水浴中復(fù)溫20分鐘以保證分離溫度。4℃或者是溫度較低的條件下離心，可能會(huì)導(dǎo)致白膜層中紅細(xì)胞污染加重。 4. 稀釋血液或洗滌細(xì)胞，不可使用含Ca、Mg離子的緩沖液及培養(yǎng)液，其成分會(huì)導(dǎo)致血細(xì)胞凝集，大大降低細(xì)胞得率及純度。 5. 由于各品牌離心機(jī)的性能不同，實(shí)驗(yàn)室環(huán)境溫度差異，可能影響分離效果，用戶(hù)可以調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù)和離心時(shí)間，摸索最佳的分離條件（具體分離條件各實(shí)驗(yàn)室自定）。 6. 部分塑料制品（如聚苯乙烯）因其帶有的靜電作用，可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞掛壁，影響分離效果。最好使用無(wú)靜電反應(yīng)的離心管，推薦使用未經(jīng)過(guò)堿處理的玻璃離心管。 7. 細(xì)胞重懸樣本的粘稠度或者是溫度差異，可能會(huì)影響分離效果，可以調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù)和離心時(shí)間，請(qǐng)摸索最佳的分離條件。 8. 如果要進(jìn)一步對(duì)分離的細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，在收集血液和分離過(guò)程中，注意無(wú)菌操作，避免污染。 9. 不同動(dòng)物的組織細(xì)胞重懸在不同比重分離液中的細(xì)胞離散系數(shù)及細(xì)胞帶電不同，用戶(hù)在制定分離液時(shí)應(yīng)提供所需分離液的比重、動(dòng)物種屬及被分離細(xì)胞的名稱(chēng)。 |
