| 產(chǎn)品編號 | CS123 |
| 英文名稱 | Neutrophils Separation Medium Kit (Human bone marrow) |
| 中文名稱 | 人骨髓中性粒細胞分離介質(zhì)試劑盒 |
| 別 名 | 人骨髓中性粒細胞分離液試劑盒 |
| 克 隆 號 | |
| CAS | |
| 理論分子量 | kDa |
| 檢測分子量 | |
| 保存條件 | 室溫避光保存，2年有效. |
| 注意事項 | This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications. |
| 產(chǎn)品介紹 |
試劑盒組成： 骨髓中性粒細胞分離液：????200mL 紅細胞裂解液：????100mL 全血及組織稀釋液：????200mL 細胞洗滌液：????200mL 產(chǎn)品簡介： 本產(chǎn)品是一種用于分離各種動物骨髓中性粒細胞的無菌、低內(nèi)毒素水平的密度梯度分離液。無菌條件下所分離的細胞可用于免疫學檢測。其分離原理是根據(jù)細胞的密度差異將葡聚糖（右旋糖酐）和泛影酸鈉按一定比例混合，調(diào)整比重、pH 值和滲透壓，經(jīng)過澄清及過濾除菌后制成一種密度梯度分離液，經(jīng)過密度梯度離心使一定密度的細胞按相應(yīng)密度梯度分布，從而將各種細胞加以分離。通過離心使一定密度的細胞按相應(yīng)密度梯度分布，從而將中性粒細胞從骨髓中分離出來。 產(chǎn)品參數(shù)： 密度：1.113±0.001g/mL 滲透壓：290~350 mOsm/kg H2O 無菌：0.1μm 濾膜過濾 骨髓單細胞懸液制備方法（僅供參考）： 小動物骨髓的采集： 1. 處死動物，無菌提取股骨和脛骨，剪去兩端軟骨，露出紅色的骨髓腔（注意盡可能少的剪走骨髓腔）。 2. 取1ml的無菌注射器，吸取少量的含有10%標準胎牛血清的稀釋液或者是含有血清的培養(yǎng)基，沖洗骨髓腔以獲得骨髓。 3. 最終制備成2×108–1×109/ml 的單細胞懸液備用。 大動物骨髓的采集： 大動物骨髓的采集可采取活體穿刺方法：先將動物麻醉、固定、局部除毛、消毒皮膚，然后估計好皮膚到骨髓的距離，把骨髓穿刺針的長度固定好。操作人員用左手把穿刺點周圍的皮膚繃緊，右手將穿刺針在穿刺點垂直刺入，輕輕左右旋轉(zhuǎn)將穿刺針鉆入，當穿刺針進入骨髓腔時常有落空感。連接注射器緩慢抽吸骨髓組織，當注射器內(nèi)抽到少許骨髓時即停止抽吸。用含10%標準胎牛血清的稀釋液調(diào)整細胞濃度為2×108–1×109/ml 的單細胞懸液備用。 常用的骨髓穿刺點： 股骨：穿刺部位在股骨內(nèi)側(cè)面,靠下端的凹面處； 胸骨：穿刺部位是胸骨體與胸骨柄連接處； 肋骨：穿刺部位是第5～7肋骨各點的中點； 脛骨：穿刺部位是股骨內(nèi)側(cè)、靠下端的凹面處。如果穿刺采用的是肋骨，穿刺結(jié)束后要用膠布封貼穿刺孔，防止發(fā)生氣胸。 中性粒細胞分離方法： 1. 制備骨髓單細胞懸液。 2. 取一支適當?shù)碾x心管，加入與組織單細胞懸液等量的分離液（分離液最少不得少于3 mL，總體積不能超過離心管的三分之二，否則會影響分離效果）。 3. 小心吸取單細胞懸液加于分離液液面上，注意保持兩液面界面清晰。（可以使用巴氏德吸管吸取單細胞懸液，然后小心的平鋪于分離液上，因為兩者的密度差異，將形成明顯的分層界面。如果樣品較多，加樣的時間較長，在離心之前出現(xiàn)紅細胞成團下沉屬正常 現(xiàn)象。） 4. 室溫，水平轉(zhuǎn)子500~900 g，離心20~30 min。（根據(jù)臟器組織單細胞懸液的量確定離心條件，單細胞懸液量越大，離心力越大，離心時間越長，具體離心條件可以自行摸索，以達到最佳分離效果，離心轉(zhuǎn)速最大不超 過1200g）。 5. 離心后將出現(xiàn)明顯的分層：最上層是稀釋液；稀釋液與分離液之間是淋巴細胞層；分離液中為粒細胞層（個體差異或者是分離條件不同，粒細胞層可能分離不明顯）；最下層為紅細胞層。 6. 小心的吸取分離液層到15mL潔凈的離心管中，10mL PBS或細胞洗滌液洗滌白膜層細胞。250g，離心10min（如有紅細胞混雜則加入適量紅細胞裂解液） 7. 棄上清，5 mL的PBS或細胞清洗液重懸細胞，250 g，離心10 min。 8. 重復步驟7 9. 棄上清，細胞重懸備用。 注意事項： 1. 開封前顛倒混勻，本分離液為無菌產(chǎn)品，為延長分離液保存時間，請在無菌條件下啟封，避免污染。 2. 待分離的組織樣本要求新鮮，避免冷凍和冷藏。 3. 本實驗要求，在正常大氣壓下，分離液、分離樣本以及分離環(huán)境溫度為（18℃~25℃）。分離液在低溫時呈較高密度，在高溫時呈較低密度。細胞分離液從冰箱取出后，不可立即使用，操作前可將樣本和分離液置于20℃水浴中復溫20分鐘以保證分離溫度。4℃或者是溫度較低的條件下離心，可能會導致白膜層中紅細胞污染加重。 4. 稀釋血液或洗滌細胞，不可使用含Ca、Mg離子的緩沖液及培養(yǎng)液，其成分會導致血細胞凝集，大大降低細胞得率及純度。 5. 由于各品牌離心機的性能不同，實驗室環(huán)境溫度差異，可能影響分離效果，用戶可以調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù)和離心時間，摸索最佳的分離條件（具體分離條件各實驗室自定）。 6. 部分塑料制品（如聚苯乙烯）因其帶有的靜電作用，可能會導致細胞掛壁，影響分離效果。最好使用無靜電反應(yīng)的離心管，推薦使用未經(jīng)過堿處理的玻璃離心管。 7. 細胞重懸樣本的粘稠度或者是溫度差異，可能會影響分離效果，可以調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù)和離心時間，請摸索最佳的分離條件。 8. 如果要進一步對分離的細胞進行培養(yǎng)，在收集血液和分離過程中，注意無菌操作，避免污染。 9. 不同動物的組織細胞重懸在不同比重分離液中的細胞離散系數(shù)及細胞帶電不同，用戶在制定分離液時應(yīng)提供所需分離液的比重、動物種屬及被分離細胞的名稱。 |
| 1、抗體溶解方法 | |
| 2、抗體修復方式 | |
| 3、常用試劑的配制 | |
| 4、免疫組化操作步驟 | |
| 5、免疫組化問題解答 | |
| 6、Western Blotting 操作步驟 | |
| 7、Western Blotting 問題解答 | |
| 8、關(guān)于肽鏈的設(shè)計 | |
| 9、多肽的溶解與保存 | |
| 10、酶標抗體效價測定程序 | |
