| 產(chǎn)品編號(hào) | CS122 |
| 英文名稱 | Lymphocyte Separation Medium Kit (Animal tissue) |
| 中文名稱 | 動(dòng)物組織淋巴細(xì)胞分離試劑盒（小鼠、大鼠等） |
| 別 名 | Animal tissue Lymphocyte Separation Medium Kit; 動(dòng)物組織淋巴細(xì)胞分離液試劑盒（小鼠、大鼠、豚鼠、雞、鴨、鵝、馬、兔、駱駝、牛、狗）; |
| 克 隆 號(hào) | |
| CAS | |
| 理論分子量 | kDa |
| 檢測(cè)分子量 | |
| 保存條件 | 室溫避光保存，2年有效. |
| 注意事項(xiàng) | This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications. |
| 產(chǎn)品介紹 |
試劑盒組成： 各種動(dòng)物臟器組織淋巴細(xì)胞分離液：??200mL 全血及組織稀釋液：??????200mL 細(xì)胞洗滌液：????????200mL 產(chǎn)品簡(jiǎn)介： 本產(chǎn)品是一種用于分離各種動(dòng)物臟器組織淋巴細(xì)胞的無菌、低內(nèi)毒素水平的密度梯度分離液。適用于從各種動(dòng)物臟器組織中分離單個(gè)核細(xì)胞（主要為淋巴細(xì)胞），無菌條件下所分離的細(xì)胞可用于免疫學(xué)檢測(cè)。其分離原理是根據(jù)細(xì)胞的密度差異將葡聚糖（右旋糖酐）和泛影酸鈉按一定比例混合，調(diào)整比重、pH 值和滲透壓，經(jīng)過澄清及過濾除菌后制成一種密度梯度分離液，經(jīng)過密度梯度離心使一定密度的細(xì)胞按相應(yīng)密度梯度分布，從而將各種細(xì)胞加以分離。通過離心使一定密度的細(xì)胞按相應(yīng)密度梯度分布，從而將淋巴細(xì)胞從各種動(dòng)物臟器組織中分離出來。 產(chǎn)品參數(shù)： 密度：1.083±0.001g/mL 滲透壓：290~350 mOsm/kg H2O 無菌：0.1μm 濾膜過濾 適用動(dòng)物種屬：小鼠、大鼠、豚鼠、雞、鴨、鵝、馬、兔、駱駝、牛、狗（脾臟、骨髓、臟器組織、腫瘤浸潤組織等）。 組織單細(xì)胞懸液制備方法（僅供參考）： 組織研磨法： 1. 無菌條件下摘取臟器組織，撕去被膜，用眼科剪將臟器組織剪成小塊。 2. 將尼龍篩網(wǎng)或者是細(xì)胞過濾篩放置于平皿上，加入少量全血及組織稀釋液（保證臟器組織及獲得的細(xì)胞處于液體環(huán)境中）。 3. 將臟器組織放置于篩網(wǎng)上，使用注射器活塞或者是無菌鑷子來研磨臟器組織（盡量控制研磨力度，保持篩網(wǎng)懸空，避免在皿底上直接研磨而造成大批細(xì)胞死亡）。 4. 研磨完全后使用全血及組織稀釋液沖洗篩網(wǎng)，收集細(xì)胞懸液，再經(jīng)濾網(wǎng)過濾。 注： 1. 可用酶消化法，使用膠原酶對(duì)臟器組織組織進(jìn)行消化，得到單細(xì)胞懸液。 2. 如果最終得到的細(xì)胞需要培養(yǎng)，那全過程所需試劑與器材均要求無菌。 3. 根據(jù)臟器組織的體積控制單細(xì)胞懸液的濃度在108~9個(gè)/mL。 淋巴細(xì)胞分離方法： 1. 制備臟器組織單細(xì)胞懸液。 2. 取一支適當(dāng)?shù)碾x心管，加入與組織單細(xì)胞懸液等量的分離液（分離液最少不得少于3 mL，總體積不能超過離心管的三分之二，否則會(huì)影響分離效果）。 3. 小心吸取單細(xì)胞懸液加于分離液液面上，注意保持兩液面界面清晰。（可以使用巴氏德吸管吸 取單細(xì)胞懸液，然后小心的平鋪于分離液上，因?yàn)閮烧叩拿芏炔町?，將形成明顯的分層界面。） 4. 室溫，水平轉(zhuǎn)子500~900 g，離心20~30 min。（根據(jù)臟器組織單細(xì)胞懸液的量確定離心條件，單細(xì)胞懸液量越大，離心力越大，離心時(shí)間越長，具體離心條件可以自行摸索，以達(dá)到最佳分離效果）。 5. 離心后，此時(shí)離心管中由上至下細(xì)胞分四層。第一層為稀釋液層；第二層為環(huán)狀乳白色淋巴細(xì)胞層；第三層為透明分離液層；第四層為紅細(xì)胞層。 6. 用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色淋巴細(xì)胞層至另一潔凈的 15 mL離心管中，向離心管中加入10ml細(xì)胞洗滌液洗滌白膜層細(xì)胞，250 g，離心10 min。 7. 棄上清，5 mL的PBS或細(xì)胞清洗液重懸細(xì)胞，250 g，離心10 min。 8. 重復(fù)步驟7 9. 棄上清，細(xì)胞重懸備用。 注意事項(xiàng)： 1. 開封前顛倒混勻，本分離液為無菌產(chǎn)品，為延長分離液保存時(shí)間，請(qǐng)?jiān)跓o菌條件下啟封，避免污染。 2. 待分離的組織要求新鮮，避免冷凍和冷藏。 3. 本實(shí)驗(yàn)要求，在正常大氣壓下，分離液、分離樣本以及分離環(huán)境溫度為（18℃~25℃）。分離液在低溫時(shí)呈較高密度，在高溫時(shí)呈較低密度。細(xì)胞分離液從冰箱取出后，不可立即使用，操作前可將樣本和分離液置于20℃水浴中復(fù)溫20分鐘以保證分離溫度。4℃或者是溫度較低的條件下離心，可能會(huì)導(dǎo)致白膜層中紅細(xì)胞污染加重。 4. 稀釋血液或洗滌細(xì)胞，不可使用含Ca、Mg離子的緩沖液及培養(yǎng)液，其成分會(huì)導(dǎo)致血細(xì)胞凝集，大大降低細(xì)胞得率及純度。 5. 由于各品牌離心機(jī)的性能不同，實(shí)驗(yàn)室環(huán)境溫度差異，可能影響分離效果，用戶可以調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù)和離心時(shí)間，摸索最佳的分離條件（具體分離條件各實(shí)驗(yàn)室自定）。 6. 部分塑料制品（如聚苯乙烯）因其帶有的靜電作用，可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞掛壁，影響分離效果。最好使用無靜電反應(yīng)的離心管，推薦使用未經(jīng)過堿處理的玻璃離心管。 7. 細(xì)胞重懸樣本的粘稠度或者是溫度差異，可能會(huì)影響分離效果，可以調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù)和離心時(shí)間，請(qǐng)摸索最佳的分離條件。 8. 吸取過多的淋巴細(xì)胞層及分離液層會(huì)導(dǎo)致分離液交界處的粒細(xì)胞被吸出從而使混雜的粒細(xì)胞數(shù)量增加。 9. 不同動(dòng)物的組織細(xì)胞重懸在不同比重分離液中的細(xì)胞離散系數(shù)及細(xì)胞帶電不同，用戶在制定分離液時(shí)應(yīng)提供所需分離液的比重、動(dòng)物種屬及被分離細(xì)胞的名稱。 可能存在的問題及解決方法： 1. 離心后目的細(xì)胞存在于血漿層或稀釋液層，可能原因是轉(zhuǎn)速過小或離心時(shí)間過短，解決辦法可以適當(dāng)增加轉(zhuǎn)速。 2. 離心后目的細(xì)胞存在于分離液中，可能原因是轉(zhuǎn)速過大或離心時(shí)間過長，解決辦法可以適當(dāng)減低轉(zhuǎn)速。 3. 離心后白膜層彌散，可能原因是細(xì)胞密度過大，解決辦法適當(dāng)調(diào)整細(xì)胞密度。 4. 離心后白膜層太淺或看不見，可能原因是細(xì)胞密度過小，解決辦法適當(dāng)調(diào)整細(xì)胞密度。 |
