| 產(chǎn)品編號(hào) | CS102 |
| 英文名稱 | Lymphocyte Separation Medium (Human) |
| 中文名稱 | 人外周血淋巴細(xì)胞分離液 |
| CAS | |
| 理論分子量 | kDa |
| 檢測(cè)分子量 | |
| 保存條件 | 室溫避光保存，2年有效. |
| 注意事項(xiàng) | This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications. |
| 產(chǎn)品介紹 |
產(chǎn)品簡(jiǎn)介： 本產(chǎn)品是一種用于分離人外周血淋巴細(xì)胞的無(wú)菌、低內(nèi)毒素水平的密度梯度分離液。適用于從人抗凝血液中分離單個(gè)核細(xì)胞（主要為淋巴細(xì)胞），無(wú)菌條件下所分離的細(xì)胞可用于免疫學(xué)檢測(cè)。其分離原理是根據(jù)血細(xì)胞的密度差異（紅細(xì)胞和粒細(xì)胞密度為1.090 g/mL左右；淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞密度為1.075~1.090 g/mL；血小板為1.030~1.035 g/mL），為此，將葡聚糖（右旋糖酐）和泛影酸鈉按一定比例混合，調(diào)整比重、pH 值和滲透壓，經(jīng)過(guò)澄清及過(guò)濾除菌后制成一種密度在1.077g/ml 并且近于等滲的溶液（分層液），經(jīng)過(guò)密度梯度離心使一定密度的細(xì)胞按相應(yīng)密度梯度分布，從而將各種血細(xì)胞加以分離。通過(guò)離心使一定密度的細(xì)胞按相應(yīng)密度梯度分布，從而將淋巴細(xì)胞從人外周血或臍帶血中分離出來(lái)。 產(chǎn)品參數(shù)： 密度：1.077±0.001g/mL 滲透壓：290~350 mOsm/kg H2O 無(wú)菌：0.1μm 濾膜過(guò)濾 操作步驟： 操作步驟： 1. 取新鮮抗凝全血（EDTA、枸櫞酸鈉或肝素抗凝均可）或者去纖維蛋白血液，用等體積（1:1）的全血及組織稀釋液或者PBS稀釋全血。 2. 在離心管中加入適量分離液（當(dāng)稀釋后血液體積小于3mL時(shí)，加入3mL分離液；大于等于3mL，加入等體積分離液。但二者的總體積不能超過(guò)離心管的三分之二，否則會(huì)影響分離效果），將稀釋后的血液平鋪到分離液液面上方，注意保持兩液面界面清晰。（可以使用巴氏德吸管吸取血液，然后將血液小心的平鋪于分離液上，因?yàn)閮烧叩拿芏炔町?，將形成明顯的分層界面。如果樣品較多加樣時(shí)間較長(zhǎng)，在離心之前出現(xiàn)紅細(xì)胞成團(tuán)下沉屬正?，F(xiàn)象。） 3. 室溫，水平轉(zhuǎn)子500~1000g，離心20~30min（血液的體積越大所需的離心力越大，離心時(shí)間越長(zhǎng)，最佳的分離條件需摸索，離心轉(zhuǎn)速最大不超過(guò)1200g）。 4. 離心后將出現(xiàn)明顯的分層：最上層是稀釋的血漿層，中間是透明的分離液層，血漿與分離液之間的白膜層即為淋巴細(xì)胞層，離心管底部是紅細(xì)胞與粒細(xì)胞。 5. 小心的吸取白膜層細(xì)胞到15mL潔凈的離心管中，10mL PBS或細(xì)胞洗滌液洗滌白膜層細(xì)胞。250g，離心10min。 6. 棄上清，5mL的PBS或細(xì)胞清洗液重懸細(xì)胞，250g，離心10min。 7. 重復(fù)步驟 6 8. 棄上清，細(xì)胞重懸備用。 分離純度： 使用人外周血淋巴細(xì)胞分離液分離的淋巴細(xì)胞純度大于90%。 注意事項(xiàng)： 1. 開(kāi)封前顛倒混勻，本分離液為無(wú)菌產(chǎn)品，為延長(zhǎng)分離液保存時(shí)間，請(qǐng)?jiān)跓o(wú)菌條件下啟封，避免污染。 2. 本分離液要求血液為新鮮抗凝血（采血2 h以內(nèi)），避免冷凍和冷藏；如果要進(jìn)一步對(duì)分離的細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，在收集血液和分離過(guò)程中，注意無(wú)菌操作，避免微生物污染。 3. 本實(shí)驗(yàn)要求，在正常大氣壓下，分離液、分離樣本以及分離環(huán)境溫度為（18℃~25℃）。分離液在低溫時(shí)呈較高密度，在高溫時(shí)呈較低密度。細(xì)胞分離液從冰箱取出后，不可立即使用，操作前可將樣本和分離液置于20℃水浴中復(fù)溫20分鐘以保證分離溫度。4℃或者是溫度較低的條件下離心，可能會(huì)導(dǎo)致白膜層中紅細(xì)胞污染加重。 4. 稀釋血液或洗滌細(xì)胞，不可使用含Ca、Mg離子的緩沖液及培養(yǎng)液，其成分會(huì)導(dǎo)致血細(xì)胞凝集，大大降低細(xì)胞得率及純度。 5. 由于各品牌離心機(jī)的性能不同，實(shí)驗(yàn)室環(huán)境溫度差異，可能影響分離效果，用戶可以調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù)和離心時(shí)間，摸索最佳的分離條件（具體分離條件各實(shí)驗(yàn)室自定）。 6. 部分塑料制品（如聚苯乙烯）因其帶有的靜電作用，可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞掛壁，影響分離效果。最好使用無(wú)靜電反應(yīng)的離心管，推薦使用未經(jīng)過(guò)堿處理的玻璃離心管。 7. 最優(yōu)抗凝劑選擇：EDTA、枸櫞酸、肝素。應(yīng)注意在血液稀釋過(guò)程中應(yīng)去除抗凝劑體積。 8. 血液樣本的粘稠度或者是溫度差異，可能會(huì)影響分離效果，可以調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù)和離心時(shí)間，請(qǐng)摸索最佳的分離條件。 9. 吸取過(guò)多的淋巴細(xì)胞層及分離液層會(huì)導(dǎo)致分離液交界處的粒細(xì)胞被吸出從而使混雜的粒細(xì)胞數(shù)量增加；吸取過(guò)多的血漿層可能會(huì)導(dǎo)致淋巴細(xì)胞中血漿蛋白及血小板污染。 10. 不同動(dòng)物血液在不同比重分離液中的細(xì)胞離散系數(shù)及細(xì)胞帶電不同，用戶在制定分離液時(shí)應(yīng)提供所需分離液的比重、動(dòng)物種屬及被分離細(xì)胞的名稱。 可能存在的問(wèn)題及解決方法： 1. 離心后目的細(xì)胞存在于血漿層或稀釋液層，可能原因是轉(zhuǎn)速過(guò)小或離心時(shí)間過(guò)短，解決辦法可以適當(dāng)增加轉(zhuǎn)速。 2. 離心后目的細(xì)胞存在于分離液中，可能原因是轉(zhuǎn)速過(guò)大或離心時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，解決辦法可以適當(dāng)減低轉(zhuǎn)速。 3. 離心后白膜層彌散，可能原因是細(xì)胞密度過(guò)大，解決辦法適當(dāng)調(diào)整細(xì)胞密度。 4. 離心后白膜層太淺或看不見(jiàn)，可能原因是細(xì)胞密度過(guò)小，解決辦法適當(dāng)調(diào)整細(xì)胞密度。 |
