| 產品編號 | C8014 |
| 英文名稱 | Phalloidin/TRITC |
| 中文名稱 | 羅丹明標記鬼筆環(huán)肽（微絲紅色熒光探針） |
| 別 名 | Phalloidin TRITC Conjugated; TRITC Phalloidin (Red); Phalloidin-TRITC; 鬼筆環(huán)肽TRITC偶聯物; 鬼筆環(huán)肽（羅丹明標記）; |
| 克 隆 號 | |
| CAS | |
| 理論分子量 | kDa |
| 檢測分子量 | |
| 保存條件 | -20℃避光干燥保存，有效期1年。 |
| 注意事項 | This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications. |
| 產品介紹 |
產品描述： 鬼筆環(huán)肽（Phalloidin）是一種來源于毒蕈類鬼筆鵝膏（Amanita phalloides）的環(huán)狀七肽毒素，以高親和力（Kd= 20 nM）選擇性結合于絲狀肌動蛋白F-actin，而不會與單體肌動蛋白G-actin結合，通常用來標記組織切片，細胞培養(yǎng)物或無細胞體系中的F-actin，從而對F-actin進行定性和定量分析。另外，鬼筆環(huán)肽衍生物也以相近的親和力結合于大小纖維，無論是動植物來源的肌肉細胞或非肌肉細胞，按照每一個肌動蛋白亞基約與一個鬼筆環(huán)肽分子的計量比結合。且非特異性結合幾乎可忽略，染色區(qū)域和非染色區(qū)域辨識度非常明顯。因此，鬼筆環(huán)肽衍生物特別適合替代肌動蛋白（Actin）抗體進行相關研究。另外鬼筆環(huán)肽衍生物很小，直徑約12-15?，分子量＜2000 Daltons，未標記肌動蛋白（Actin）的許多生理特性都得以維持，比如，同肌動蛋白結合蛋白如肌球蛋白，原肌球蛋白，DNase I等仍能發(fā)生反應；鬼筆環(huán)肽標記的纖維絲仍可穿透固相肌球蛋白基質；以及甘油抽提的肌纖維標記后仍可收縮等。 鬼筆環(huán)肽（Phalloidin）的結合阻止絲狀肌動蛋白（微絲）的解離，穩(wěn)定微絲結構，從而破壞微絲的聚合-去聚合的動態(tài)平衡。此特性使得肌動蛋白聚合發(fā)生的臨界濃度（CC）降至＜1μg/mL，因此，可用作一種聚合促進劑。此外，鬼筆環(huán)肽還可抑制F-actin的ATP水解活性。 本品為TRITC標記的鬼筆環(huán)肽，染色反應特異性強，對比性高，具有比Actin抗體更好的染色效果，適合用作F-actin的定性和定量檢測。另外，經本品結合后的F-actin仍能維持actin自身具有的許多生物學特性。且本品的結合沒有物種差異性，適用性廣泛。 工作液配制： 本品為 20μM 儲存液，總量為 300μL。按照 100 nM 的工作液濃度來換算，可制備總量為 60 mL 的工作液。建議收到產品后，根據單次使用量，對母液進行小量分裝，-20℃避光凍存，一年穩(wěn)定。 實驗前，用 1×PBS稀釋儲存液到需要的工作濃度。推薦工作濃度為：80~200nM（1:100-250 倍稀釋），工作液現配現用。最佳稀釋比例可以根據實際染色效果進行適當調整。 染色步驟： 1. 細胞爬片生長 24h，使其密度達到 50%匯合度。 2. 吸掉培養(yǎng)液，37℃預熱的 1×PBS（pH 7.4）清洗細胞 2 次。 3. 使用4%甲醛PBS溶液進行細胞固定，室溫固定 10min。 注：避免固定劑中含有甲醇成分，因為甲醇在固定過程中可能破壞肌動蛋白。 4. 室溫條件下，用 PBS 清洗細胞 2~3 次，每次 10min。 5. 室溫條件下，用丙酮（≤-20℃）脫水或者用 0.5% Triton X-100 溶液透化處理 5min。 6. 室溫條件下，用 PBS 清洗細胞 2~3 次，每次 10min。 7. 取 200μl 配制好的 TRITC 標記鬼筆環(huán)肽工作液，覆蓋住蓋玻片上的細胞，室溫避光孵育 30min（通常情況下，4℃~37℃ 孵育皆可）。 注：為了降低背景，可于 TRITC 標記的鬼筆環(huán)肽工作液內加入 1% BSA；另外，孵育過程中為了避免溶液揮發(fā)，可將蓋玻片轉移到一個密封的容器內。 8. 用 PBS 清洗蓋玻片 3 次，每次 5min。 9. 用 200μl DAPI 溶液（濃度：100 nM）對細胞核進行復染，約 30s。 10. 用 PBS 清洗蓋玻片，然后倒置在已經滴有一滴 Fluoromount-GTM 水溶性封片劑的載玻片上。使用紙巾輕輕檫掉多余封片劑，然后用指甲油永久封片。此法制備的標本玻片可置于 4℃避光保存，通常 6 個月內可繼續(xù)做 F-actin 染色分析。 注：也可以直接使用含有 DAPI 的抗熒光淬滅封片劑合并步驟 9. 10。 11. 熒光顯微鏡或者共聚焦顯微鏡下進行熒光觀察，TRITC（Ex/Em=545/570nm），DAPI（Ex/Em=364/454nm）。 注意事項： 1. 鬼筆環(huán)肽具有毒性，需小心操作（對人的半數致死劑量 LD50 約 2mg/kg）。 2. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。 |
| 1、抗體溶解方法 | |
| 2、抗體修復方式 | |
| 3、常用試劑的配制 | |
| 4、免疫組化操作步驟 | |
| 5、免疫組化問題解答 | |
| 6、Western Blotting 操作步驟 | |
| 7、Western Blotting 問題解答 | |
| 8、關于肽鏈的設計 | |
| 9、多肽的溶解與保存 | |
| 10、酶標抗體效價測定程序 | |
