| 產(chǎn)品編號 | C6209 |
| 英文名稱 | Yeast Genomic DNA Extraction Kit |
| 中文名稱 | 酵母基因組DNA提取試劑盒 |
| 別 名 | Yeast Genome Extraction Kit; |
| 克 隆 號 | |
| CAS | |
| 理論分子量 | kDa |
| 檢測分子量 | |
| 保存條件 | 室溫干燥可保存一年，4℃保存可更長時間。 |
| 注意事項 | This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications. |
| 產(chǎn)品介紹 |
產(chǎn)品簡介 本試劑盒適用于從酵母樣品中提取高純度的總 DNA，本品無需使用苯酚、氯仿等有機溶劑抽提，可獲得最大為 50 kb 的 DNA，同時對100 bp 的 DNA 片段也能有效的回收。本試劑盒采用優(yōu)化的緩沖液體系使裂解液中的 DNA 高效結(jié)合在硅膠膜上，而其他污染物可流過膜，使用低鹽緩沖液或水洗脫，即可獲得高純度的 DNA。提取的 DNA 可直接用于酶切、PCR、Real-Time PCR、文庫構(gòu)建、Southern Blot、分子標記等下游實驗。 產(chǎn)品組份 Buffer GTL: 15 ml Buffer GL: 15 ml Buffer GW1 (concentrate): 13 ml Buffer GW2 (concentrate): 15 ml Buffer GE: 15 ml Proteinase K: 25mg Proteinase K Storage Buffer: 1.25ml Lyticase Working Buffer: 30ml Lyticase: 300μl Glass Beads: 2g Spin Columns DM With Collection Tubes: 50 自備試劑 無水乙醇，β-巰基乙醇。 實驗準備 1. 向 Proteinase K 中加入 1.25 ml Proteinase K Storage Buffer 使其溶解，-20?C 保存。配制好的 Proteinase K 勿長時間室溫放置，避免反復(fù)凍融，以免影響其活性。 2. 樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則會導(dǎo)致提取的 DNA 片段較小且提取量下降。對于有些細胞壁較厚以及在培養(yǎng)階段會產(chǎn)生大量代謝物的酵母，建議在生長早期收集樣品。 3. Lyticase Working Buffer 在使用前請加入β-巰基乙醇，使其終濃度為 0.1%。 4. 第一次使用前應(yīng)按照試劑瓶標簽說明在 Buffer GW1 和 Buffer GW2 中加入無水乙醇。 5. 使用前請檢查 Buffer GTL 和 Buffer GL 是否出現(xiàn)結(jié)晶或者沉淀，如有結(jié)晶或者沉淀，請將 Buffer GTL 和 Buffer GL 于 65?C 水浴重新溶解。 6. 如果下游實驗對 RNA 污染比較敏感，可以在加入 Buffer GL 前加入 4 μl DNase-Free 的 RNase A（100 mg/ml）。 操作步驟 1. 取 1-5 ml 酵母培養(yǎng)物（最多不超過 5×107 個細胞，一般對于釀酒酵母 OD600=1.0 時，相當于 1-2×107 細胞/ml），12,000 rpm （~13,400×g）離心 1 分鐘，收集菌體沉淀，盡量吸棄上清。 注意：菌液較多時，可以通過幾次離心將菌體沉淀收集到一個離心管中。 2．酵母細胞壁的去除：向菌體中加入 600 μl Lyticase Working Buffer（使用前檢查是否加入β-巰基乙醇，使其終濃度為 0.1%），并加入 5 μl Lyticase，充分混勻。30?C 處理 30 分鐘。4,000 rpm（~1,500×g）離心 10 分鐘，棄上清，收集沉淀。 注意：以上為 5×107 酵母細胞 Lyticase 用量，根據(jù)酵母的菌株和酵母細胞數(shù)量的不同，所用的 Lyticase 的濃度和孵育時間應(yīng)該進行適當調(diào)整。 3．向沉淀中加入 200 μl Buffer GTL，加入 40 mg 玻璃珠（Glass Beads），渦旋 5 分鐘。 4．加入 20 μl Proteinase K 混勻。55?C 振蕩水浴至細胞完全裂解。若無振蕩水浴箱，溫育期間每 20-30 分鐘顛倒混勻一次。（一般不超過 1 小時細胞即可完全裂解）。 注意：如需去除 RNA，在上述步驟完成后加入 4 μl 100 mg/ml 的 RNase A 溶液。 5．12,000 rpm 離心 5 分鐘，小心吸取上清至新離心管中。 6．加入 200 μl Buffer GL，充分混勻。70?C 孵育 10 分鐘，其間顛倒混勻數(shù)次，12,000 rpm 離心 5 分鐘，將上清移到一個新的離心管中。 注意：若孵育后溶液未變清亮，說明細胞裂解不徹底，可能導(dǎo)致提取 DNA 量少和提取的 DNA 不純。 7．加入 200 μl 無水乙醇，充分顛倒混勻，此時可能會出現(xiàn)絮狀沉淀。短暫離心，使管壁和管蓋上的液體集中到管底。 8．將步驟 7 所得溶液和沉淀全部加入到已裝入收集管的吸附柱（Spin Columns DM）中，若一次不能加完溶液，可分多次轉(zhuǎn)入。12,000 rpm 離心 1 分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。 9．向吸附柱中加入 500 μl Buffer GW1（使用前檢查是否已加入無水乙醇），12,000 rpm 離心 1 分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。 10. 向吸附柱中加入 500 μl Buffer GW2（使用前檢查是否已加入無水乙醇），12,000 rpm 離心 1 分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。 注意：如需進一步提高 DNA 純度，可重復(fù)步驟 10。 11. 12,000 rpm 離心 2 分鐘，倒掉收集管中廢液。將吸附柱置于室溫數(shù)分鐘以徹底晾干。 12．將吸附柱置于一個新的離心管（自備）中，向吸附柱的中間部位懸空加入 50-200 μl Buffer GE 或滅菌水，室溫放置 2-5 分鐘，12,000 rpm 離心 1 分鐘，收集 DNA 溶液，-20?C 保存 DNA。 注意： 1）如果下游實驗對 pH 值或 EDTA 敏感，可以用滅菌水洗脫。洗脫液的 pH 值對洗脫效率有很大影響，若用水做洗脫液應(yīng)保證其 pH 值在 7.0-8.5（可以用 NaOH 將水的 pH 值調(diào)到此范圍），pH 值低于 7.0 時洗脫效率不高。 2）離心之前室溫孵育 5 分鐘可以增加產(chǎn)量。 3）用另外的 50-200 μl Buffer GE 或滅菌水再次洗脫可以增加產(chǎn)量。 4）如果要提高 DNA 的終濃度，可以將步驟 10 所得的 DNA 洗脫液重新加至吸附膜上，重復(fù)步驟 10；若洗脫體積小于 200 μl，可以增加 DNA 的終濃度，但可能會減少總產(chǎn)量。如果 DNA 量小于 1 μg，推薦用 50 μl Buffer GE 或滅菌水洗脫。 5）因為保存在水中的 DNA 會受到酸性水解作用的影響，如需長期保存，推薦用 Buffer GE 洗脫并于-20?C 保存。 |
| 1、抗體溶解方法 | |
| 2、抗體修復(fù)方式 | |
| 3、常用試劑的配制 | |
| 4、免疫組化操作步驟 | |
| 5、免疫組化問題解答 | |
| 6、Western Blotting 操作步驟 | |
| 7、Western Blotting 問題解答 | |
| 8、關(guān)于肽鏈的設(shè)計 | |
| 9、多肽的溶解與保存 | |
| 10、酶標抗體效價測定程序 | |
