| 產(chǎn)品編號 | C6206 |
| 英文名稱 | Bacterial Genome DNA Extraction Kit |
| 中文名稱 | 細菌基因組DNA提取試劑盒 |
| 別 名 | Bacteria Genomic DNA Kit; 細菌基因組提取試劑盒; |
| 克 隆 號 | |
| CAS | |
| 理論分子量 | kDa |
| 檢測分子量 | |
| 保存條件 | Proteinase K保存于-20℃；其他組份室溫干燥可保存一年，4℃保存可更長時間。 . |
| 注意事項 | This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications. |
| 產(chǎn)品介紹 |
產(chǎn)品簡介 本試劑盒適用于從細菌中制備高質(zhì)量的基因組 DNA。優(yōu)化的緩沖液體系能迅速裂解細菌和滅活細胞內(nèi)核酸酶，然后基因組 DNA 在高鹽狀態(tài)下選擇性吸附于硅基質(zhì)膜上，再通過快速的漂洗、離心步驟，去除細菌代謝物和蛋白等，最后低鹽的洗脫緩沖液將純凈基因組 DNA 從硅基質(zhì)膜上洗脫下來。使用本試劑盒可從過夜培養(yǎng)的細菌培養(yǎng)液中快速提取高純度的基因組 DNA，可直接進行 PCR、酶切和雜交等相關(guān)分子生物學(xué)實驗。 產(chǎn)品組份 Buffer GTL: 12 ml Buffer GL: 12 ml Buffer GW1: 13 ml Buffer GW2: 15 ml Buffer GE: 10 ml Proteinase K: 1 ml Spin Column With Collection Tubes: 50 套 自備試劑 溶菌酶（革蘭氏陽性菌用）、溶菌酶緩沖液（20 mM Tris，pH 8.0；2 mM Na2-EDTA；1.2% Triton X-100）、無水乙醇、RNase A（可選）。 操作步驟 注意：使用前請先在緩沖液 Buffer GW1 和 Buffer GW2 中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶上的標(biāo)簽。 1. 取 0.5-3 ml 過夜培養(yǎng)的菌液，室溫 10,000 rpm 離心 1 min，棄上清。注意：根據(jù)菌液的濃度決定取液量，當(dāng) OD600=1 時，1ml 菌液濃度為 109個細胞，菌液的量不要超過 109個細胞，太多會使離心柱的膜堵塞，提取的基因組 DNA 的量減少，純度降低。 2. 加入 200 ul Buffer GTL，用槍頭充分吹打或用渦旋振蕩器充分懸浮。注意：對于較難破壁的革蘭氏陽性菌，可略過第 2 步驟，加入溶菌酶進行破壁處理，具體方法為：加入 180 μl 終濃度為 20 mg/ml 的溶菌酶緩沖液(20 mM Tris, pH 8.0；2 mM Na2-EDTA；1.2% Triton X-100；溶菌酶必須用溶菌酶干粉溶解在緩沖液中進行配制，否則會導(dǎo)致溶菌酶無活性)，37 ℃處理 30 min 以上。如要去除 RNA，可加入濃度為 100 mg/ml 的 RNase A 4 ul，室溫處理 5 min。 3. 加入 20 ul Proteinase K 溶液，充分混勻。 4. 加入 200 ul Buffer GL，充分混勻，56℃水浴 10 min，孵育過程中每隔一段時間顛倒或震蕩離心管使樣本分散均勻。溶液變得清亮后短暫離心，以去除管蓋內(nèi)壁的水珠。注意：Buffer GL 加入時可能會產(chǎn)生白色沉淀，一般 56℃時會消失，不影響后續(xù)實驗，如溶液未變清亮，說明細胞裂解不徹底，可能導(dǎo)致提取的 DNA 量少或者提取的 DNA 不純。 5. 加入 200 ul 無水乙醇，充分震蕩，此時可能會出現(xiàn)絮狀沉淀，短暫離心以去除管蓋內(nèi)壁水珠。 6. 將一個離心吸附柱放入收集管中，將上一步所得溶液和絮狀沉淀轉(zhuǎn)移到吸附柱中，12,000 rpm 離心 1 min，棄收集管中的濾液。 7. 向吸附柱內(nèi)加入 500 ul 的 Buffer GW1，室溫 12,000 rpm 離心 30 sec，棄收集管中濾液。注意：按要求在 Buffer GW1 中加入無水乙醇，用后及時蓋緊，以防乙醇揮發(fā)。 8. 向吸附柱內(nèi)加入 600 ul Buffer GW2，室溫 12,000 rpm 離心 30 sec，棄收集管中廢液。注意：Buffer GW2 為濃縮液，按要求加入無水乙醇，用后及時蓋緊，以防乙醇揮發(fā)。 9. 向吸附柱內(nèi)加入 500 ul Buffer GW2，室溫 12,000 rpm 離心 2 min，棄收集管中廢液。注意：此步不能省略，否則殘留乙醇會影響基因組 DNA 的后續(xù)使用。 10. 將離心吸附柱置于一個新的 1.5 ml 塑料離心管（自備）中，加入 50 ~ 100 ul Buffer GE，室溫放置 2 min，12,000 rpm 離心 1 min，離心管底溶液即基因組 DNA。注意：為增加洗脫效率，可將洗脫液 Buffer GE 在 60℃預(yù)熱。如需使用去離子水洗脫，可用 NaOH 調(diào)整其 pH 值在 7.0 - 8.5 之間，為了增加回收率，可將得到的溶液重新加入到吸附柱中，室溫放置 2 min，再次離心收集。 |
