| 產(chǎn)品編號(hào) | C6205 |
| 英文名稱 | Plant Genomic DNA Extraction Kit |
| 中文名稱 | 植物基因組DNA提取試劑盒 |
| 別 名 | Plant Genome Extraction Kit; |
| 克 隆 號(hào) | |
| CAS | |
| 理論分子量 | kDa |
| 檢測(cè)分子量 | |
| 保存條件 | 室溫干燥可保存一年，4℃保存可更長(zhǎng)時(shí)間。 . |
| 注意事項(xiàng) | This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications. |
| 產(chǎn)品介紹 |
產(chǎn)品簡(jiǎn)介 本試劑盒采用高效、專一結(jié)合核酸的離心吸附柱和獨(dú)特的緩沖系統(tǒng)，適合從各種不同的新鮮或凍存植物組織中提取基因組DNA，并可最大限度去除植物組織中的雜質(zhì)。本試劑盒無(wú)需使用酚/氯仿抽提，操作安全。提取的基因組DNA片段大、純度高、質(zhì)量穩(wěn)定可靠，適用于 PCR、熒光定量 PCR、分子標(biāo)記、文庫(kù)構(gòu)建等實(shí)驗(yàn)。 產(chǎn)品組份 Buffer LP1: 25 ml (50T) Buffer LP2: 10 ml (50T) Buffer LP3 (concentrate): 21 ml (50T) Buffer GW2 (concentrate): 15 ml (50T) Buffer GE: 7.5 ml (50T) RNase A（10mg/ml）: 300 μl (50T) Spin Columns DM with Colletion Tubes 50: (50T) 自備試劑 無(wú)水乙醇。 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備 1．樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則會(huì)導(dǎo)致提取的DNA片段較小且提取量下降。 2．第一次使用前應(yīng)按照試劑瓶標(biāo)簽的說(shuō)明在Buffer LP3 加27ml無(wú)水乙醇和Buffer GW2 加45ml無(wú)水乙醇。使用前請(qǐng)檢查Buffer LP1和Buffer LP2是否出現(xiàn)結(jié)晶或者沉淀，如有結(jié)晶或者沉淀，請(qǐng)將Buffer LP1和Buffer LP2于56?C水浴重新溶解。 操作步驟 1．取植物新鮮組織100 mg左右或干重組織約20 mg，加入液氮充分研磨。 2．將研磨后的粉末收集到離心管（自備）中，加入400 μl Buffer LP1和6 μl RNase A（10 mg/ml），渦旋振蕩1分鐘，室溫放置10分鐘，使其充分裂解。 注意：1）使用渦旋振蕩或移液器吹打，充分裂解組織，組織裂解不完全會(huì)影響最終的DNA得率。2）請(qǐng)勿在使用前將Buffer LP1與RNase A混合。 3．加入130 μl Buffer LP2，混勻，渦旋震蕩1分鐘。 4．12,000 rpm（~13,400×g）離心5分鐘，將上清移至新的離心管（自備）中。 5．加入1.5倍體積的Buffer LP3（使用前檢查是否已加入無(wú)水乙醇），充分混勻（如500 μl濾液加入750 μl Buffer LP3）。注意：加入Buffer LP3后應(yīng)立即混勻，可能會(huì)產(chǎn)生沉淀但不影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。 6．將上步所得溶液和沉淀全部加入到已裝入收集管的吸附柱（Spin Columns DM）中，若一次不能加完溶液，可分多次轉(zhuǎn)入。12,000 rpm 離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。 7．向吸附柱中加入500 μl Buffer GW2（使用前檢查是否已加入無(wú)水乙醇），12,000 rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。 注意：如吸附膜呈現(xiàn)綠色，向吸附柱中加入500 μl無(wú)水乙醇，12,000 rpm 離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。 8．重復(fù)步驟7。 9．12,000 rpm離心2分鐘，倒掉收集管中的廢液。將吸附柱置于室溫?cái)?shù)分鐘，以徹底晾干。注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的乙醇去除，乙醇的殘留會(huì)影響后續(xù)的酶促反應(yīng)（酶切、PCR 等）。 10.將吸附柱放到一個(gè)新離心管（自備）中，向吸附膜的中間部位懸空滴加50-100 μl Buffer GE或滅菌水，室溫放置2-5分鐘，12,000 rpm 離心1分鐘，收集DNA溶液。-20?C保存DNA。 注意：1）如果下游實(shí)驗(yàn)對(duì)pH值或EDTA敏感，可以用滅菌水洗脫。洗脫液的pH值對(duì)洗脫效率有很大影響，若用水做洗脫液應(yīng)保證其pH值在7.0-8.5（可以用NaOH將水的pH值調(diào)到此范圍），pH值低于7.0時(shí)洗脫效率不高。 2）離心之前室溫孵育5分鐘可以增加產(chǎn)量。 3）如果要提高DNA的終濃度，可以將步驟10所得的DNA洗脫液重新加至吸附膜上，重復(fù)步驟10；若洗脫體積小于100 μl，可以增加DNA的終濃度，但可能會(huì)減少DNA的總產(chǎn)量。如果所得DNA的量小于1 μg，推薦用50 μl Buffer GE進(jìn)行洗脫。 4）因?yàn)楸４嬖谒械腄NA會(huì)受到酸性水解作用的影響，如需長(zhǎng)期保存，推薦用Buffer GE洗脫并于-20?C保存。 |
