| 產(chǎn)品編號(hào) | C6202 |
| 英文名稱 | Plasmid Extraction Mini Kit (Endotoxin Free) |
| 中文名稱 | 去內(nèi)毒素質(zhì)粒大量提取試劑盒 |
| 別 名 | Plasmid Extraction Maxi Kit; Free Endotoxin Plasmid Extraction Maxi Kit; Multi-color Endofree Pureplasmid Maxi kit; 多彩質(zhì)粒小提; 多彩無(wú)內(nèi)毒素質(zhì)粒大提; 質(zhì)粒大量提取試劑盒; |
| 克 隆 號(hào) | |
| CAS | |
| 理論分子量 | kDa |
| 檢測(cè)分子量 | |
| 保存條件 | 室溫干燥可保存一年，4℃保存可更長(zhǎng)時(shí)間。 |
| 注意事項(xiàng) | This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications. |
| 產(chǎn)品介紹 |
產(chǎn)品簡(jiǎn)介 本試劑盒適用于無(wú)內(nèi)毒素高純度質(zhì)粒 DNA 的大量制備與純化，柱上去除內(nèi)毒素，操作簡(jiǎn)單。菌體經(jīng)改良的堿裂解處理，質(zhì)?？蓮木w中釋放出來(lái)，并特異、高效地被離心柱硅膠膜吸附。通過(guò)去蛋白液和漂洗液的清洗可去除蛋白及其他雜質(zhì)，最后得到高純度的無(wú)內(nèi)毒素質(zhì)粒 DNA，所得質(zhì)?？芍苯佑糜诿盖小⑥D(zhuǎn)化、PCR、測(cè)序、細(xì)胞轉(zhuǎn)染等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。 產(chǎn)品優(yōu)勢(shì) 1. 操作簡(jiǎn)易、快捷、高效（顏色易判斷、得率高）、省時(shí)。 2. 純度高：沉淀致密，去雜干凈。 3. 內(nèi)毒素去除簡(jiǎn)單：柱上去除內(nèi)毒素，方便快速，清除干凈。 注意事項(xiàng) 1. 細(xì)菌培養(yǎng)時(shí)間一般為14小時(shí)左右，如接種量大則應(yīng)減少培養(yǎng)時(shí)間，過(guò)度培養(yǎng)會(huì)降低質(zhì)粒質(zhì)量甚至導(dǎo)致質(zhì)粒 DNA 突變。 2. 使用前應(yīng)將全部RNase A溶液加到Solution I中混合均勻，2-8℃可穩(wěn)定保存6個(gè)月；每次使用時(shí)都要注意 Solution II 和 III 是否形成沉淀，如有沉淀 37℃溶解后再用； 3. 加入 Solution II 裂解細(xì)菌，直至溶液成紫紅色粘稠透明狀，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致質(zhì)粒 DNA 變性； 4. 質(zhì)粒的產(chǎn)量跟細(xì)菌量、質(zhì)粒拷貝數(shù)、質(zhì)粒大小和操作規(guī)范程度密切相關(guān)。 操作步驟 1. 柱平衡：向吸附柱中（吸附柱放入收集管中）加入 2.5 ml 的平衡液 BL，10,000 rpm 離心 2 min，棄收集管中濾液，將吸附柱重新放回收集管中。（請(qǐng)使用當(dāng)天處理過(guò)的柱子） 2. 取 100-200 ml（如果是低拷貝質(zhì)?？梢允占嗑海┻^(guò)夜培養(yǎng)的菌液，室溫 10,000 rpm 離心 2 min，棄上清。 3. 加入 10 ml Solution I，旋渦震蕩或用移液器充分吹打使菌體重懸均勻，呈現(xiàn)出均勻混濁的棕紅色。注意：菌體沉淀一定要懸浮均勻，如有未徹底懸浮的菌塊會(huì)影響裂解，導(dǎo)致提取的質(zhì)粒濃度及純度降低。 4. 加入 10 ml Solution II，溫和顛倒混勻使菌體完全裂解，直到溶液變成清亮、粘稠的紫紅色。注意：不可劇烈震蕩，以免造成基因組 DNA 片段的污染，所用時(shí)間不要超過(guò) 5 min，以免質(zhì)粒受到破壞，如未完全變得清亮，可能是菌體太多，可增加 Solution II 的用量，在后續(xù)的操作中 Solution III 的用量也要相應(yīng)增加。 5. 加入 10 ml Solution III，立即溫和顛倒混勻，可見(jiàn)紅黃相間的絮狀物產(chǎn)生，繼續(xù)混勻直到完全變?yōu)辄S色，室溫靜置 2 min，然后 10,000 rpm 離心 10 min，將上清轉(zhuǎn)移至干凈離心管（自備）中，注意不要帶入沉淀。注意：Solution III 加入后應(yīng)立即混合，避免產(chǎn)生局部沉淀，如果上清中還有紫色漂浮物，說(shuō)明復(fù)性不充分，繼續(xù)混勻至溶液顏色完全變?yōu)槌吻宓狞S色。 6. 加入 0.3 倍濾液體積的異丙醇，上下顛倒混勻。注意：加入異丙醇過(guò)多容易導(dǎo)致 RNA 污染。 7. 將步驟 5 中液體與異丙醇的混合溶液轉(zhuǎn)移到平衡好的吸附柱中（使用當(dāng)天用平衡液處理的吸附柱，放入 50 ml 收集管中），靜置 2min，讓質(zhì)粒 DNA 與吸附柱中的硅膠膜充分結(jié)合。10,000 rpm 離心 1 min，棄收集管中的濾液。注意：吸附柱的最大容積為 15 ml，所以上步中所得溶液分多次過(guò)柱。如果離心機(jī)轉(zhuǎn)子傾角較大時(shí)，建議加入吸附柱的溶液體積不超過(guò) 10 ml，以防發(fā)生漏液現(xiàn)象。 8. 向吸附柱中加入 5 ml ToxinOut Buffer，室溫靜置 10 min，10,000 rpm 離心 1 min，棄收集管中濾液。 9. 加入 10 ml Buffer WB2，室溫 10,000 rpm 離心 1 min，棄收集管中濾液。注意：Buffer WB2 為濃縮液，按要求加入無(wú)水乙醇，用后應(yīng)立即蓋緊瓶蓋，以防酒精揮發(fā)。 10. 加入 5 ml Buffer WB2，室溫 10,000 rpm 離心 1 min，棄收集管中濾液。 11. 室溫 10,000 rpm 離心 5 min，甩干殘留液體。 12. 將離心吸附柱置于一個(gè)新的 50 ml 塑料離心管中，打開(kāi)管蓋，放置 5 min，使乙醇徹底揮發(fā)干凈。 13. 加入 1-2 ml 洗脫液 Buffer EB，室溫放置 2 min，10,000 rpm 離心 2 min，離心管底溶液即質(zhì)粒 DNA。注意：為增加洗脫效率，可將得到的質(zhì)粒溶液重新加入到吸附柱中重復(fù)步驟 11 一次，如需使用去離子水洗脫，可用 NaOH 調(diào)整其 pH值在 7.0 - 8.5 之間。 低拷貝或大質(zhì)粒（>10 kb）提取 如果所提質(zhì)粒為低拷貝質(zhì)粒，或大于 10 kb 的大質(zhì)粒，或提取農(nóng)桿菌質(zhì)粒，或提取革蘭氏陽(yáng)性菌質(zhì)粒，應(yīng)加大菌體使用量，使用 300-500 ml 過(guò)夜培養(yǎng)物，最后洗脫液 Buffer EB 60℃水浴預(yù)熱，吸附和洗脫時(shí)可以適當(dāng)延長(zhǎng)時(shí)間，以增加提取效率。其它步驟相同。 |
| 產(chǎn)品圖片 |
外觀及包裝
外觀及包裝
外觀及包裝
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