| 產(chǎn)品編號 | C6201 |
| 英文名稱 | Plasmid Extraction Mini Kit |
| 中文名稱 | 彩色質(zhì)粒小量提取試劑盒(柱式) |
| 別 名 | Plasmid Extraction Mini Kit(with column); 多彩質(zhì)粒小提; |
| 克 隆 號 | |
| CAS | |
| 理論分子量 | kDa |
| 檢測分子量 | |
| 保存條件 | 室溫干燥可保存一年，4℃保存可更長時間。 |
| 注意事項 | This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications. |
| 產(chǎn)品介紹 |
產(chǎn)品簡介 本試劑盒利用多彩的顏色變化，監(jiān)控質(zhì)粒提取的每步過程，讓實驗變得高效并輕松有趣。本試劑盒用于高純度質(zhì)粒 DNA 的小量制備。菌體經(jīng)堿裂解、高鹽、低 pH 處理，質(zhì)?？蓮木w中釋放出來，并特異、高效地被離心吸附柱吸附。通過清洗液的洗滌可去除雜質(zhì)，在低鹽、高 pH 條件下洗脫，最后得到高達 20 ug 純度較高的質(zhì)粒 DNA。使用本試劑盒每次可處理 1 -5 ml 過夜培養(yǎng)的菌液，可在 30 min之內(nèi)完成提取任務(wù)。所得質(zhì)?？芍苯佑糜诿盖?、轉(zhuǎn)化、PCR、測序等各種分子生物學(xué)實驗。 產(chǎn)品優(yōu)勢 1. 操作簡易、快捷、高效（得率高）。 2. 純度高：沉淀致密，去雜干凈。 3. 含有指示劑，可直觀判斷操作過程中樣本裂解程度。 注意事項 1. 細(xì)菌培養(yǎng)時間一般為15小時左右，如接種量大則應(yīng)減少培養(yǎng)時間，過度培養(yǎng)會降低質(zhì)粒質(zhì)量甚至導(dǎo)致質(zhì)粒 DNA 突變。 2. 使用前應(yīng)將全部RNase A溶液加到Solution I中混合均勻，2-8℃可穩(wěn)定保存6個月；若溶液II、III 產(chǎn)生沉淀，應(yīng)在使用前置于37℃下溶解沉淀；同時并注意溶液 I，II 和 III 的用量比例，若細(xì)菌量增大，需按比例放大這些溶液的使用量。 3. 隨菌體增多應(yīng)延長 Solution II 的作用時間，直至溶液成粘稠透明狀，但時間過長會導(dǎo)致質(zhì)粒 DNA 變性。 4. 質(zhì)粒的產(chǎn)量跟細(xì)菌量、質(zhì)?？截悢?shù)、質(zhì)粒大小和操作規(guī)范程度密切相關(guān)。 5. 純化的質(zhì)粒在電泳中表現(xiàn)為2-3條帶有時甚至為4-6條帶均屬正常，未分開的環(huán)套質(zhì)粒，易被誤判為基因組 DNA。 操作步驟 1. 柱平衡：向離心吸附柱中加入 400 μl Buffer BL，靜止 1 min，室溫下 12,000 rpm 離心 1 min，棄除收集管中的廢液，將離心吸 附柱重新放回收集管中。注意：請使用當(dāng)天處理過的吸附柱。 2. 取 1-5 ml（如果是低拷貝質(zhì)?？梢允占嗑海┻^夜培養(yǎng)的菌液，室溫 12,000 rpm 離心 1 min，盡量將上清去除干凈。注意：根據(jù)菌液的濃度決定取液量，濃度高時取 1.5 ml 菌液離心即可，濃度低時可多收集一次。 3. 加入 250 ul Solution I，旋渦震蕩或用移液器充分吹打使菌體重懸均勻，呈現(xiàn)出均勻渾濁的棕紅色。注意：菌體沉淀一定要懸浮均勻，如有未徹底懸浮的菌塊會影響裂解，導(dǎo)致提取的質(zhì)粒濃度及純度降低。 4. 加入 250 ul Solution II，溫和顛倒混勻使菌體完全裂解，直到溶液變成清亮、粘稠的紫紅色。注意：不可劇烈震蕩，以免造成基因組 DNA 片段的污染，所用時間不要超過 5 min，以免質(zhì)粒受到破壞，如未完全變得清亮，可能是菌體太多，可增加 Solution II的用量，在后續(xù)的操作中 Solution III的用量也要相應(yīng)增加。 5. 加入 350 ul Solution III，立即溫和顛倒混勻，可見紅黃相間的沉淀物產(chǎn)生，繼續(xù)混勻直到完全變?yōu)辄S色，室溫靜置 2 min，然后 12,000 rpm 離心 5 min。注意：Solution III 加入后應(yīng)立即混合，避免產(chǎn)生局部沉淀，如果上清中還有紫色漂浮物，說明復(fù)性不充分，繼續(xù)混勻至溶液顏色完 全變?yōu)槌吻宓狞S色。 6. 小心將上清液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，靜置 2 min，讓質(zhì)粒 DNA 與吸附柱中的硅膠膜充分結(jié)合。12,000 rpm 離心 30 sec，棄收集管中濾液。 7. 可選步驟：向吸附柱中加入 500 ul Buffer WB1，12,000 rpm 離心 30 sec，棄收集管中濾液。注意：如果宿主菌是 endA-，如 DH5α 或 TOP10，此步驟可省略。如果宿主菌是 endA+，如 TG1、BL21、HB101、JM101 等，此步驟不可省略，因這些宿主菌含有大量的核酸酶，易降解質(zhì)粒。如果提取低拷貝質(zhì)粒也推薦采用此步驟。 8. 加入 500 ul Buffer WB2，室溫 12,000 rpm 離心 30 sec，棄收集管中濾液。注意：Buffer WB 2 為濃縮液，初次使用按要求加入無水乙醇，用后應(yīng)立即蓋緊瓶蓋，以防酒精揮發(fā)。 9. 重復(fù)步驟 8 一次。 10. 室溫 12,000 rpm 離心 2 min，甩干殘留液體。注意：此步不能省略，否則殘留乙醇會影響質(zhì)粒的后續(xù)使用。 11. 將離心吸附柱置于一個新的 1.5 ml 塑料離心管（自備）中，加入 50 ~ 100 ul 的洗脫液 Buffer EB，室溫放置 2 min。12,000 rpm 離心 1 min，離心管底溶液即質(zhì)粒 DNA。注意：為增加洗脫效率，可將洗脫液在 60℃預(yù)熱。如需使用去離子水洗脫，可用 NaOH 調(diào)整其 pH 值在 7.0 - 8.5 之間，為了增加質(zhì)?；厥章剩蓪⒌玫降娜芤褐匦录尤氲诫x心管中，室溫放置 2 min，再次離心收集。 低拷貝或大質(zhì)粒（>10 kb）提取 如果所提質(zhì)粒為低拷貝質(zhì)粒，或大于 10 kb 的大質(zhì)粒，或提取農(nóng)桿菌質(zhì)粒，或提取革蘭氏陽性菌質(zhì)粒，應(yīng)加大菌體使用量，使用 5-10 ml 過夜培養(yǎng)物，同時按照比例增加 Solution I、II、III 的用量，洗脫液 Buffer EB 應(yīng)在 60℃水浴預(yù)熱，在吸附和洗脫時可以適當(dāng)延 長時間，以增加提取效率。其它步驟相同。 |
