導讀:
熒光抗體標記技術(shù)是將熒光標記物以化學方法與特異性抗體共價結(jié)合，在抗體-熒光結(jié)合物與對應(yīng)的抗原特異結(jié)合后，通過熒光顯微鏡等儀器設(shè)備觀察熒光標記物的信號情況，從而實現(xiàn)對待檢物的定位、定性或定量檢測。在實驗過程中，我們經(jīng)常會遇到如何選擇熒光標記物、多重熒光檢測時如何進行熒光標記物的搭配等問題。為此，小編特意采訪了Bioss抗體標記專家，讓我們一起聽聽專家的分享吧~
Q1:市面上的熒光標記物很多，如何判斷一個熒光標記物是否適合標記抗體呢？
作為標記的熒光標記物應(yīng)符合以下要求：
● 具有能與抗體形成共價鍵的化學基團，且與抗體結(jié)合后不易解離，同時未結(jié)合的熒光標記物及其降解產(chǎn)物易于清除；
● 熒光效率高，在與抗體結(jié)合后仍能保持較高的熒光效率；
● 與抗體結(jié)合后不影響抗體原有的生化與免疫性質(zhì)；
● 標記方法簡單，安全無毒；
● 與抗體結(jié)合穩(wěn)定，終產(chǎn)物易于保存。
Q2:在Bioss實驗室，經(jīng)常用到哪些熒光標記物，可以推薦一些嗎？
Bioss實驗室可以提供基于29種標記方式的標記抗體產(chǎn)品及標記服務(wù)，比較常用的有：
● 小分子熒光素：FITC, Rhodamin● Cy系列：Cy3, Cy5, Cy5.5, Cy7
● Alexa Fluor系列：AF350, AF488, AF555, AF594, AF647, AF680, AF750
● 熒光蛋白：PE, APC, PerCP
● 熒光串聯(lián)標記：PE-Cy, PerCP-Cy等
Q3:以上提到的熒光標記物，經(jīng)常會用于哪些實驗?zāi)兀?/span>
下表匯總了不同種類熒光標記物的適用實驗類型，供大家參考
Q4:對于有多重熒光檢測需求的實驗應(yīng)用，比如多重免疫熒光檢測和流式細胞術(shù)等，在做多重熒光染色方案設(shè)計時，需要遵循哪些原則？
在Bioss實驗室，我們做多重熒光檢測設(shè)計實驗時，一般會遵循以下原則：
● 確認檢測設(shè)備的參數(shù)：熒光顯微鏡通常是一個鹵素光源配若干個濾光片，流式細胞儀通常是2-3個激光管配若干個檢測通道；
● 在可選范圍內(nèi)選擇更強的熒光，常用熒光及其強弱程度排序: PE>APC>PE-Cy5>PE-Cy5.5/PerCP-Cy5.5>FITC；
● 細胞表面蛋白可以選擇PE等熒光蛋白，需要進入到細胞內(nèi)的檢測，盡量選擇小分子熒光素；
● 對熒光多重染色，熒光素與抗體組合需要考慮目的抗原的含量，樣本中含量低的指標優(yōu)先選擇熒光較強的熒光素。如果是分步加入熒光抗體，考慮到熒光的衰減，按照熒光素的強弱排序依次加入。
