發(fā)表者：北京博奧森生物 發(fā)表時(shí)間：2016-2-15
使用基因工程的方法來表達(dá)蛋白質(zhì)，必須經(jīng)過純化才能實(shí)現(xiàn)最終目的。不同性質(zhì)的蛋白質(zhì)純化條件有所不同，亦很難摸索。所以將目的蛋白和一個(gè)親和純化的標(biāo)簽蛋白進(jìn)行融合表達(dá)-通過親和純化Tag蛋白來純化目的蛋白，就成為常用的間接手段。
而His-Tag這個(gè)只有6個(gè)組氨酸大小的標(biāo)簽蛋白在pH值8.0時(shí)不帶電，幾乎沒有免疫原性。經(jīng)過對很多種蛋白的融合驗(yàn)證試驗(yàn)，無論對蛋白的分泌、折疊結(jié)構(gòu)、甚至功能都沒有影響，即可放在N端也可放在C端，而更重要的是使用6HIS抗體裝配的親和層析純化柱，通過免疫親和層析純化的方法-將帶有6個(gè)組氨酸標(biāo)簽的目標(biāo)蛋白純化出來，不但目標(biāo)蛋白純度高，而且簡單、易行，成本低。所以對融合蛋白純化很方便、實(shí)用。因此，已得到國內(nèi)外人員的廣泛應(yīng)用。
His-Tag的特點(diǎn)：
1） 6xHis與不同的Sepharose純化填料結(jié)合(捆綁)，可不受構(gòu)象的影響，在天然或變形的條件下可進(jìn)行進(jìn)一步純化。
2） 可在溫和的洗脫液環(huán)境中，其結(jié)合、洗滌及洗脫步驟不會對蛋白結(jié)構(gòu)產(chǎn)生影響。
3） 6xHis標(biāo)簽比普通（Tag）要小得多，經(jīng)純化后的蛋白可直接進(jìn)行下游操作。可用于任何表達(dá)系統(tǒng)（包括：細(xì)菌，桿狀病毒和哺乳動物）
4） 6xHis標(biāo)簽在生理溶液pH下不帶電荷，其標(biāo)簽不會干涉重組蛋白的結(jié)構(gòu)和功能， 6xHis不會影響蛋白分泌
5） 6xHis標(biāo)簽免疫原性差，重組蛋白可以不必除去標(biāo)簽而直接作為抗原進(jìn)行免疫
博奧森生物技術(shù)公司已成功開發(fā)His-Tag-6個(gè)組氨酸抗體。
